МультиСКРИН

Ранняя диагностика, распознавание стадий

заболевания и диагностика болезни на поздних

стадиях

Современные данные свидетельствуют, что около 33,4 миллионов человек

(от 31,1 до 35,8 миллионов) живут с ВИЧ. Это больше, чем когда бы то ни было,

благодаря большей продолжительности жизни, обусловленной успехами

противовирусной терапии, и общему росту населения. Число смертей от

СПИДа за последние 5 лет снизилось на 10%, поскольку больше людей по-

лучили доступ к жизнеспасающему лечению. Количество новых случаев

инфицирования оценивается в 2,7 миллионов случаев (2,4-3,0 миллиона),

из которых 430 000 случаев заражения детей – в основном, произошедших

при вертикальной передаче вируса от матери во время беременности. По-

этому диагностика и мониторинг так же необходимы для эффективного ле-

чения ВИЧ-инфекции/СПИДа, как и лекарственные препараты. Чем рань-

ше поставлен диагноз, тем лучше результат лечения. (http://www.who.int)

Изменчивость между ВИЧ-1 и ВИЧ-2 требует использовать антигены

(АГ), специфичные обеим разновидностям вируса, чтобы обнаруживать

антитела (АТ) как к ВИЧ-1, так и к ВИЧ-2. Присутствие антител к ВИЧ-1 и/

или ВИЧ-2 и/или антигена р24 в крови свидетельствует о возможной

инфекции ВИЧ-1 или ВИЧ-2. На ранних стадиях инфекции ВИЧ, но до

момента сероконверсии, в пробах сыворотки или плазмы могут быть

обнаружены антигены ВИЧ. Структурным белком ВИЧ, наиболее часто

используемым в качестве маркера заболевания, служит ядерный бе-

лок р24, роль которого особенно велика на ранней стадии инфекции,

во время серологического окна.

«Набор реагентов для одновременного иммуноферментного выявления
основных аналитов возбудителей четырех социально значимых заболеваний
(ВИЧ, гепатит В, гепатит С, сифилис)
«Биопалитра мультиСКРИН»
по ТУ 21.20.23-009-23548172-2017»
2
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1 Назначение
Для диагностики ин витро.
«Набор реагентов для одновременного иммуноферментного выявления
основных аналитов возбудителей четырех социально значимых
заболеваний (ВИЧ, гепатит В, гепатит С, сифилис) «Биопалитра
мультиСКРИН» по ТУ 21.20.23-009-23548172-2017» предназначен для
качественного одновременного выявления суммарных антител (IgM, IgG) к
вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ) первого (ВИЧ-1 субтипы A, В, С, Е
группы M, ВИЧ-1 группы О) и второго типа (ВИЧ-2); антигена нуклеокапсида
(р24/р26) ВИЧ-1 и ВИЧ-2; поверхностного антигена HBsAg вируса гепатита B
(субтипы ayw1, adw2); суммарных антител (IgM, IgG) к вирусу гепатита C;
суммарных антител (IgM, IgG) к возбудителю сифилиса Treponema pallidum без
идентификации возбудителя методом иммуноферментного анализа в
сыворотке и плазме крови человека. Для клинических и эпидемиологических
исследований, для службы крови; для скрининга (первичной лабораторной
диагностики) ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С, сифилиса, для использования на
автоматических анализаторах открытого типа и ручной постановки.
1.2 Комплектация
«Набор реагентов для одновременного иммуноферментного выявления
основных аналитов возбудителей четырех социально значимых заболеваний
(ВИЧ, гепатит В, гепатит С, сифилис) «Биопалитра мультиСКРИН» по ТУ
21.20.23-009-23548172-2017» (далее по тексту – набор, набор реагентов, набор
реагентов «Биопалитра мультиСКРИН», «Биопалитра мультиСКРИН»)
представлен в двух комплектациях:
— Мультискрин-96 (на 96 совместных выявлений аналитов возбудителей четырех
инфекций, включая контрольные образцы);
— Мультискрин-576 (на 576 совместных выявлений аналитов возбудителей
четырех инфекций, включая контрольные образцы).
1.3 Рекомендации по применению
Рекомендуется для использования в клинических и эпидемиологических
исследованиях, а также службой крови; для скрининга (первичной лабораторной
диагностики) ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С, сифилиса.
1.4 Область применения
Клиническая лабораторная диагностика.
1.5 Предназначенный пользователь набора реагентов
Сотрудники клинико-диагностических лабораторий медицинских
учреждений.
Только для профессионального использования.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1 Принцип метода
3
«Биопалитра мультиСКРИН» представляет собой набор реагентов, в основе
которого лежит метод твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) в
варианте двойного специфического связывания («сэндвич»-формат).
Определяющие реагенты набора – иммуносорбент и конъюгаты.
Иммуносорбент представляет из себя 96-луночный полистироловый
планшет с сорбированными детекторами выявляемых аналитов:
— рекомбинантные антигены и синтетические пептиды мимикрирующие
консервативные иммунодоминантные антигенные детерминанты эктодомена
белков оболочки (envelop gp41/gp36) ВИЧ-1/2 в том числе субтипа О;
— моноклональные человеческие антитела к антигену нуклеокапсида
(р24/р26) ВИЧ 1 и ВИЧ-2;
— поликлональные антитела кролика против антигена HBsAg вируса
гепатита В, полученные иммунизацией животных нативным HBsAg;
— полиэпитопные рекомбинантные антигены и синтетические пептиды,
мимикрирующие консервативные иммунодоминантные антигенные
детерминанты структурных (Core) и неструктурных (NS3, NS4, NS5) белков
вируса гепатита С;
— рекомбинантные антигены, мимикрирующие консервативные
иммунодоминантные антигенные детерминанты белков р17, р47, p15 и Tmpa
Treponema pallidum;
Основой конъюгата 1 являются:
— биотинилированные полиэпитопные рекомбинантные антигены и
синтетические пептиды мимикрирующие антигены вируса гепатита С,
соответствующие тем же антигенным детерминантам, что используются в
иммуносорбенте;
— биотинилированные конъюгаты рекомбинантных антигенов и
синтетических пептидов мимикрирующие антигены ВИЧ 1/2 (включая субтип О),
соответствующие тем же антигенным детерминантам, что используются в
иммуносорбенте;
— биотинилированные моноклональные человеческие антитела
специфичные против белка нуклеокапсида ВИЧ 1 и ВИЧ 2 (р24/р26);
— биотинилированные моноклональные антитела мыши против HBsAg
вируса гепатита В;
— биотинилированные конъюгаты рекомбинантных антигенов
мимикрирующие антигены Treponema pallidum, соответствующие тем же
антигенным детерминантам, что используются в иммуносорбенте;
Основой набора в составе конъюгата 2 являются:
— наноструктурированый (ядро/оболочка) конъюгат рекомбинантного Coreфрагмента стрептавидина с гетерополимером пероксидазы хрена;
— конъюгаты рекомбинантных антигенов и синтетических пептидов
мимикрирующие антигены ВИЧ 1/2 (включая субтип О), вируса гепатита С с
гетерополимером пероксидазы хрена, соответствующие тем же антигенным
детерминантам, что используются в иммуносорбенте;
Система выявления ферментативной активности иммуносорбента
использует хромоген на основе тетраметилбензидина (ТМБ).
На первой стадии анализа, исследуемые и контрольные образцы
инкубируют с компонентами, сорбированными в лунках планшета-
4
иммуносорбента в присутствии биотинилированных конъюгатов. В случае
наличия в исследуемом образце искомых антигенов и антител происходит
образование иммунных комплексов «антитело-антиген-конъюгат» или «антигенантитело-конъюгат».
На второй стадии анализа, после отмывки, образовавшиеся на первой
стадии иммунные комплексы «антитело-антиген», «антитело-антигенконъюгат» или «антиген-антитело-конъюгат» выявляют добавлением конъюгата
стрептавидина с полимеризованной пероксидазой хрена, конъюгатов антигенов
ВИЧ и вируса гепатита С с полимеризованной пероксидазой в составе
конъюгата 2.
Визуализация результата происходит при добавлении в лунки
иммуносорбента рабочего раствора хромогена, при этом происходит измерение
суммарной ферментативной активности в каждой лунке. В результате
взаимодействия пероксидазы с субстратом (H2O2) в присутствии хромогена
(ТМБ) развивается окрашивание раствора, интенсивность окрашивания
нелинейно зависит от количества выявленных иммунных комплексов.
После измерения оптической плотности в лунках планшета на основании
значения ОПкрит, исследуемые образцы могут быть оценены как положительные
или отрицательные.
2.2 Состав набора
Шифр Наименование реагента Мультискрин-96 Мультискрин-576
Реагенты
ИС
Иммуносорбент – планшет с сорбированной смесью
рекомбинантных антигенов и синтетических пептидов ВИЧ,
моноклональных человеческих антител к антигену р24/р26 ВИЧ1 и ВИЧ-2, поликлональных антител к HBsAg вируса гепатита В,
рекомбинантных антигенов и синтетических пептидов вируса
гепатита С и Treponema pallidum
1 6
ВР Восстанавливающий раствор – раствор для восстановления сухих
компонентов; бесцветная жидкость;
1 фл.
(25 мл)
1 фл
(125 мл)
К+
ВИЧ
Cлабоположительный контрольный образец из цельной
сыворотки или плазмы крови человека, содержащий антитела к
ВИЧ, инактивированный, сухая аморфная масса в виде таблетки
или порошка желтого цвета
1 фл.
(восстановить 0,75
мл воды)
1 фл.
(восстановить 1,5
мл воды)
К+
HBsAg
Cлабоположительный контрольный образец из цельной
сыворотки или плазмы крови человека, содержащий HBsAg
вируса гепатита В, инактивированный, сухая аморфная масса в
виде таблетки или порошка желтого цвета
1 фл.
(восстановить 0,75
мл воды)
1 фл.
(восстановить 1,5
мл воды)
К+
ВГС
Cлабоположительный контрольный образец из цельной
сыворотки или плазмы крови человека, содержащий антитела к
вирусу гепатита С, инактивированный, сухая аморфная масса в
виде таблетки или порошка желтого цвета
1 фл.
(восстановить 0,75
мл воды)
1 фл.
(восстановить 1,5
мл воды)
К+
Сиф
Cлабоположительный контрольный образец из цельной
сыворотки или плазмы крови человека, содержащий антитела к
Treponema pallidum, инактивированный, сухая аморфная масса в
виде таблетки или порошка желтого цвета
1 фл.
(восстановить 0,75
мл воды)
1 фл.
(восстановить 1,5
мл воды)
К- Отрицательный контрольный образец из сыворотки или плазмы
крови человека, не содержащий антител и антигенов к ВИЧ,
вирусу гепатита В, вирусу гепатита С, Treponema pallidum,
инактивированный, сухая аморфная масса в виде таблетки или
порошка желтого цвета
2 фл.
(восстановить 0,75
мл воды)
2 фл.
(восстановить 1,5
мл воды)
РРО Раствор разведения образца, зеленого цвета жидкость. 1 фл. 1 фл.
5
(5 мл) (30 мл)
РК-1 Конъюгат 1 — смесь биотинилированных антигенов ВИЧ 1/2,
Тreponema pallidum, антител против р24/р26 ВИЧ 1/2 и HВsAg,
антигенов гепатита С, сухая аморфная масса в виде таблетки или
порошка красного цвета.
1 фл.
(восстановить 5
мл ВР)
1 фл.
(восстановить 25
мл ВР)
РК-2 Конъюгат 2 — смесь конъюгатов стрептавидина и антигенов ВИЧ
½, вируса гепатита С с полимеризованной пероксидазой, сухая
аморфная масса в виде таблетки или порошка желтого цвета.
2 фл.
(восстановить 7
мл ВР)
3 фл.
(восстановить 25
мл ВР)
ТМБ Раствор хромогена ТМБ, бесцветная прозрачная жидкость. 1 фл.
(0,8 мл)
1 фл.
(4 мл)
СР Субстратный буферный раствор с перекисью водорода для
разведения хромогена, бесцветная или розового цвета прозрачная
жидкость.
1 фл.
(12 мл)
3фл.
(25мл)
ФСБ-Т Концентрат промывочного раствора 25-кратный (фосфатносолевой буферный раствор с добавлением твина), бесцветная
прозрачная жидкость.
1 фл.
(50 мл)
1 фл.
(250 мл)
СТОП Стоп-раствор, разбавленный раствор серной кислоты, бесцветная
прозрачная жидкость.
1 фл.
(6 мл)
2 фл.
(30мл)
Пленка для заклеивания лунок иммуносорбента одноразовая 4 24
Ванночка для растворов одноразовая 4 24
Эксплуатационная документация
Инструкция по применению набора реагентов 1 1
Все комплектации набора реагентов рассчитаны на возможность как ручной
постановки, так и на автоматических анализаторах открытого типа. Цветовая
кодировка растворов позволяет осуществлять спектрофотометрическую
верификацию внесения реагентов при использовании автоматических
анализаторов. Программа автоматического анализатора составляется согласно
инструкции по применению прибора.
2.3 Число анализируемых проб биологического материала
Набор, в зависимости от комплектации, рассчитан на 96 или 576
совместных выявлений аналитов четырех социально значимых инфекций,
включая контрольные образцы. Для исследования малых партий образцов
(только для ручной постановки) возможно проведение шести постановок ИФА
по 16 образцов (включая контрольные) с использованием комплектации
Мультискрин-96 или двенадцати постановок по 48 образцов (включая
контрольные) с использованием комплектации Мультискрин-576.
Набор комплектуется всеми необходимыми реагентами, кроме воды
очищенной.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Нижний порог обнаружения*.
Нижний порог обнаружения антигена р24 ВИЧ-1 составляет 25 пг/мл
(образец №3 рабочей панели предприятия «Панель лиофильно высушенных
сывороток и плазмы крови человека, содержащих и не содержащих аналиты,
выявляемые при четырех социально значимых заболеваниях (ВИЧ, гепатит В,
гепатит С, сифилис) “КП Мультиспектр”» положителен). Нижний порог
обнаружения поверхностного антигена HBsAg вируса гепатита В составляет 0,1
6
МЕ/мл (образец №1 «КП Мультиспектр» положителен).
При разведении образцов «КП Мультиспектр» №5 (содержит антитела к
белкам ВИЧ-1), 8 (содержит антитела к белкам ВИЧ-2), 11 (содержит антитела к
белкам вируса гепатита С) и 14 (содержит антитела к белкам Treponema pallidum)
в 2 раза, результат анализа положительный.
Чувствительность* составляет 100%.
3.2 Специфичность*.
Образцы №17 и №18 «КП Мультиспектр» интерпретируются как
отрицательные.
Образцы №1 (содержит 0,1 МЕ/мл HBsAg вируса гепатита В), №3
(содержит 25 пг/мл р24 ВИЧ-1), №5-7 (содержат антитела к белкам ВИЧ-1), №
8-10 (содержат антитела к белкам ВИЧ-2) №11-13 (содержат антитела к белкам
вируса гепатита С), №14-16 (содержат антитела к белкам Treponema pallidum)
«КП Мультиспектр» интерпретируются, а образцы №2 (содержит 0,05 МЕ/мл
HBsAg вируса гепатита В) и №4 (содержит 5 пг/мл р24 ВИЧ-1) могут
интерпретироваться как положительные.
Специфичность* составляет 100%.
3.3 Воспроизводимость (для ручной постановки и постановки на автоматическом
анализаторе)*.
Внутрисерийный коэффициент вариации (CV, %) оптических плотностей
(ОП) положительных контролей (К+ ВИЧ, К+ HBsAg, К+ ВГС и К+ Сиф),
разведенных в 4 раза промывочным раствором, не более 8%. Внутрисерийный
коэффициент вариации (CV, %) коэффициентов позитивности (КП),
определяемый для двух уровней положительных контрольных образцов в одной
аналитической серии (для каждого аналита), не более 8%.
Межсерийный коэффициент вариации (CV, %) КП, определяемый для двух
уровней положительных контрольных образцов в 20ти аналитических сериях
(для каждого аналита), не более 15%.
Коэффициент вариации КП, определенный для двух уровней
положительных контрольных образцов в условиях воспроизводимости (в разных
лабораториях, разными операторами, с использованием различного
оборудования), не превышал 15%.
3.4 Интерферирующие вещества.
С достоверным результатом могут быть исследованы образцы,
содержащие до 33 г/л эквивалента триглециридов (гиперлипидемия),
гемоглобин до 1 г/л (гемолизированные образцы), билирубин до 100 мг/л
(иктеричные образцы).
3.5 Диагностическая специфичность и диагностическая чувствительность.
Аналит Количество
образцов
Диагностическая
чувствительность, %
95% ДИ,
нижняя
границаверхняя
граница
Диагностическая
чувствительность, %
95% ДИ,
нижняя
границаверхняя
граница
Ручная постановка Автоматический анализатор
ВИЧ1, ВИЧ2 750 100 99,5-100 100 99,5-100
Гепатит В
(HBsAg)
228 100 98,4-100 100 98,4-100
Гепатит С 410 100 99,1-100 100 99,1-100
Treponema
pallidum
175 100 97,9-100 100 97,9-100
7
ВИЧ1, ВИЧ2,
гепатит В
(HBsAg)
35
100 90,0-100 100 90,0-100
ВИЧ1, ВИЧ2,
гепатит C
35 100 90,0-100 100 90,0-100
ВИЧ1, ВИЧ2,
Treponema
pallidum
35
100 90,0-100 100 90,0-100
ВИЧ1, ВИЧ2,
гепатит В,
гепатит C
35
100 90,0-100 100 90,0-100
Всего 1703 100 99,8-100 100 99,8-100
Аналит Количество
образцов
Диагностическая
специфичность, %
95% ДИ,
нижняя
границаверхняя
граница
Диагностическая
специфичность, %
95% ДИ,
нижняя
границаверхняя
граница
Ручная постановка Автоматический анализатор
Образцы сыворотки и
плазмы крови, содержащие
аналиты других
заболеваний, но не
содержащие аналитов ВИЧ,
вирусов гепатита В и С,
T.pallidum
315 99,1 97,2-99,8 99,1 97,2-
99,8
При исследовании образцов сыворотки и плазмы крови от случайной выборки
доноров диагностическая чувствительность составила 100% (95% доверительный интервал 96,97%-100,00%), диагностическая специфичность составила
99,55% (95% доверительный интервал 99,36-99,72%, 5974 отрицательных результата из 6000 отрицательных образцов).
В Приложении 2 к инструкции по применению приведены таблицы с
данными по специфичности и чувствительности, полученными при
исследовании образцов стандартных и квалификационных панелей
отечественного и зарубежного производства.
* — Показатели правильности определения основаны на использовании рабочей панели предприятия «Панель лиофильно
высушенных сывороток и плазмы крови человека, содержащих и не содержащих аналиты, выявляемые при четырех
социально значимых заболеваниях (ВИЧ, гепатит В, гепатит С, сифилис) «КП Мультиспектр»».
4.МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1 Потенциальный риск применения – 3 класс (Приказ Министерства
здравоохранения РФ от 06.06.2012 г. № 4н «Об утверждении номенклатурной
классификации медицинских изделий»).
4.2 Меры предосторожности при использовании по назначению – соблюдение
требования ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) «Лаборатории медицинские.
Требования безопасности», «Инструкции по мерам профилактики
распространения инфекционных заболеваний при работе в клиникодиагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» (Утв.
МЗ СССР 17 января 1991 г.) и СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями
паразитарных болезней».
4.3 Хранить в недоступном для детей месте. Использовать для лечебнопрофилактических и санитарно-профилактических учреждений в соответствии с
8
требованиями СанПиН 2.1.3.2630-10.
4.4 РРО, ВР содержат в своем составе в качестве консерванта ProClin 300,
который может абсорбироваться через кожу и является сенсибилизирующим
агентом. Но в используемых концентрациях является нетоксичным. При
попадании на кожу или в глаза, необходимо немедленно промыть водой эти
участки тела.
4.5 Все реагенты набора, за исключением СТОП, являются нетоксичными.
Серная кислота, входящая в состав СТОП, обладает раздражающим действием.
При попадании СТОП на кожу и слизистые, промыть пораженный участок
большим количеством проточной воды.
4.6 При работе с исследуемыми и контрольными образцами рассматривать их
как потенциально инфекционный материал и использовать средства
индивидуальной защиты (халат, шапочку или косынку, кожаные тапочки,
одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, защитные очки), не
пипетировать растворы ртом.
4.7 Все использованные материалы, инструменты и оборудование, рабочее место
дезинфицировать в соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 «Безопасность
работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней» и МУ 287-113 «Методические указания
по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий
медицинского назначения».
4.8 Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
4.9 Для маркировки изделия и его реагентов использованы предупредительные
символы. Их значение приведено в Приложении 4 к инструкции по применению.
4.10 УТИЛИЗАЦИЯ НАБОРА РЕАГЕНТОВ.
В процессе использования набора реагентов и утилизации наборов
реагентов с истекшим сроком годности токсичные отходы не образуются.
Собранные в пластиковые закрывающиеся емкости использованные флаконы,
наконечники, перчатки, ветошь для обработки поверхностей; так же как и
наборы реагентов с истекшим сроком годности, вскрытые но не использованные
наборы, использованные наборы, наборы с поврежденной упаковкой:
утилизируют по классу Б, как эпидемиологически опасные отходы в
соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами» и МУ 287-113
«Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и
стерилизации изделий медицинского назначения». Для обеззараживания и/или
обезвреживания отходов использовать зарегистрированные в РФ дезсредства и
оборудование в соответствии с инструкциями по их применению. Отходы
утилизировать через организации, имеющие лицензию на этот вид деятельности.
5.ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ*
• вода очищенная;
• бумага фильтровальная лабораторная;
• дозаторы полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками,
позволяющие отбирать объемы жидкостей от 10 до 1000 мкл;
9
• цилиндр мерный второго класса точности вместимостью до 100 мл;
• цилиндр мерный второго класса точности вместимостью до 1000 мл;
• дозатор полуавтоматический многоканальный со сменными наконечниками,
позволяющий отбирать объемы жидкостей до 400 мкл;
• термостатируемый шейкер с частотой вращения до 900 об/мин,
поддерживающий температуру 42±1°С;
• устройство для промывки лунок планшетов иммуносорбентов промывочным
раствором;
• спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности
растворов в лунках планшета иммуносорбента при длинах волн 450 и 620 — 700
нм
либо
• анализатор автоматический открытого типа «Evolis» (РУ № ФСЗ
2009/05133), Freedom EVO (ФСЗ 2008/03047)
* При отсутствии вышеперечисленного оборудования и материалов допускается использование других
средств, имеющих характеристики не хуже приведенных. Оборудование должно быть
зарегистрировано в Российской Федерации в установленном порядке.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Идентификацию и прослеживаемость анализируемых образцов (проб
пациента) проводить в соответствии с системой менеджмента качества
лаборатории.
Для ИФА использовать свежеприготовленные анализируемые образцы.
Допустимо использование образцов, хранившиеся не более семи суток при
температуре от 2 до 8 ºС, или не более шести месяцев при температуре минус
20 ºС.
Подготовить анализируемые образцы, хранившиеся в
холодильнике/морозильной камере, для анализа. Образцы, хранившиеся в
морозильной камере, разморозить. Каждый анализируемый образец,
хранившийся в холодильнике/морозильной камере, прогреть до температуры от
17 до 27 ºС и тщательно перемешать.
Минимальный объем исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови при
осуществлении скринингового исследования анализа равен 100 мкл.
Антикоагулянты (гепарин, ЭДТА, цитрат натрия) не влияют на результаты
анализа.
Для исключения ложноположительных результатов анализируемые
образцы готовить и хранить в условиях, исключающих возможность
бактериального пророста. Необходимо осветлять анализируемые образцы,
содержащие осадок и агрегаты, путем центрифугирования в течение
15 мин при частоте вращения 3000 об/мин. Не использовать анализируемые
образцы с выраженным гемолизом, гиперлипидемией и бактериемией.
Избегать повторных циклов замораживания-оттаивания анализируемых
образцов.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1 Несоблюдение описанных ниже требований может привести к искажению
результатов анализа.
10
7.1.1 Не использовать реагенты с истекшим сроком годности.
7.1.2 Для приготовления рабочего раствора хромогена использовать
одноразовые емкости и наконечники для дозаторов. Мерный цилиндр и емкость
для приготовления промывочного раствора, многоразовые емкости для
подготовки реагентов к работе должны быть тщательно вымыты и промыты
водой очищенной, желательна их стерилизация.
7.1.3 При ручной промывке, планшет промыть 5 раз, полностью заполняя лунки
иммуносорбента (от 300 до 400 мкл в лунку), не допуская переливания
промывочного раствора через края лунок, и не касаясь лунок наконечниками.
Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее
45 секунд. По окончании промывки необходимо тщательно удалить влагу из
лунок.
При использовании автоматического устройства, планшет промыть 5 раз,
рекомендуется использовать режим отмывки с переполнением «Overflow» с
объемом наполнения 700-800 мкл в лунку, время между заполнением и
опорожнением лунок должно быть не менее 45 секунд. Необходимо настроить
оборудование на минимальное время вакуума при аспирации во избежание
высушивания лунок планшета. Установить забор жидкости из центра лунки при
выполнении аспирации. Не осуществлять режим придонной промывки (bottom
wash). Не использовать две программы промывки подряд. Режим перекрестной
аспирации «Crosswise» может применяться только в завершающем цикле
отмывки. Не допускать вспенивания промывочного раствора ограничением
скорости его потока при заполнении лунок. Для настройки работы промывателя
и удовлетворительной воспроизводимости результата, обращаться к
уполномоченному сервисному инженеру.
7.1.4 Не допускать высыхания лунок иммуносорбента между отдельными
операциями.
7.1.5 Ванночки, в случае повторного наполнения рабочими растворами
конъюгатов и хромогена, не обрабатывать дезинфицирующими растворами и
моющими средствами. При повторном использовании ванночку для рабочего
раствора конъюгатов промыть проточной водой и тщательно ополоснуть водой
очищенной. При повторном использовании ванночку для рабочего раствора
хромогена сразу после работы промыть 70 % раствором этилового спирта и
тщательно ополоснуть водой очищенной. Никогда не использовать одну и ту же
ванночку для рабочих растворов конъюгатов и рабочего раствора хромогена.
7.1.6 При использовании автоматического устройства для промывки планшетов
иммуносорбентов необходимо следить за состоянием емкости для
промывочного раствора и соединительных шлангов: в них не должно быть
признаков бактериального или грибкового роста. Раз в неделю желательно
емкость для промывочного раствора и шланги промывать раствором 70 %
этилового спирта и затем водой очищенной.
7.1.7 Пипетки и рабочие поверхности обрабатывать только раствором 70 %
этилового спирта, не использовать во время проведения ИФА перекись водорода
или хлорамин, другие содержащие активный кислород, активный хлор вещества.
7.1.8 Для дезинфекции и утилизации отходов реагентов набора,
вспомогательных материалов и исследуемых образцов, рекомендуется
использовать дезинфицирующие средства, не оказывающие негативного
11
воздействия на качество ИФА (которые не содержат активные кислород и хлор,
ионы тяжелых металлов). Рекомендуются средства на основе спиртов или
четвертичных аммониевых соединений.
7.1.9 Пленка для заклеивания лунок иммуносорбента является одноразовой и
повторному использованию после снятия не подлежит. При использовании части
набора необходимо отрезать кусок пленки нужного размера для каждой стадии
инкубации.
7.1.10 При проведении анализа не допускается использование реагентов из наборов разных серий, а также использование ТМБ, стоп-раствора и промывочного
раствора других фирм-производителей.
7.2 Подготовка реагентов
7.2.1 Подготовка иммуносорбента.
Вскрыть упаковку иммуносорбента. Подготовить необходимое количество
стрипов используемого иммуносорбента к работе. Оставшиеся стрипы вынуть из
рамки и упаковать в пакет с влагопоглотителем, тщательно закрыв пластиковую
застежку.
Хранение: неиспользованные стрипы иммуносорбента хранить в пакете с
влагопоглотителем в течении срока годности набора при температуре от 2 °С до
8 °С.
7.2.2 Приготовление промывочного раствора
Перемешать содержимое флакона с ФСБ-Т. Во флаконе допускается
наличие кристаллического осадка и пены. При выпадении осадка прогреть
раствор в термостате при температуре 37 °С до полного его растворения.
В соответствии с числом используемых стрипов отобрать необходимое
количество ФСБ-Т, развести его водой очищенной согласно Таблице 1 и
тщательно перемешать. При использовании целого флакона ФСБ-Т развести его
содержимое в 25 раз водой очищенной и тщательно перемешать.
Хранение: промывочный раствор в чистой плотно закрытой емкости не
более 72 часов при температуре от 17 °С до 27 °С. Неиспользованный ФСБ-Т в
закрытом флаконе в течении срока годности набора при температуре от 2 °С до
27 °С.
7.2.3 Приготовление СТОП реагента
СТОП-реагент готов к применению. В соответствии с числом
используемых стрипов отобрать в ванночку необходимое количество согласно
Таблице 1.
Хранение:
— неиспользованный реагент СТОП в закрытых флаконах в течение срока
годности набора при температуре от 2 °С до 27 °С.
7.2.4 Приготовление контрольных образцов К+ВИЧ, К+HBsAg, К+ВГС,
К+Сиф и К-.
Восстановить лиофильно высушенные контрольные образцы добавлением
во флакон воды очищенной до указанного объема. Перемешать, не допуская
вспенивания. Перед использованием выдержать в течение 10 мин при
температуре от 17 °С до 27 °С.
Восстановленные контрольные образцы готовы к применению. Для
использования отобрать пипеткой с новым сменным наконечником
12
необходимые объемы из флаконов.
Хранение: лиофилизованные К+ВИЧ, К+HBsAg, К+ВГС, К+Сиф и К- в
закрытых флаконах в течение срока годности набора при температуре от 2 °С до
8 °С; восстановленные К+ВИЧ, К+HBsAg, К+ВГС, К+Сиф и К- в закрытых
флаконах при температуре от 2 °С до 8 °С не более 5 суток.
7.2.5 Приготовление растворов конъюгатов 1 и 2 (РК-1, РК-2)
Восстановить лиофильно высушенные РК-1, РК-2 добавлением во флакон
ВР до указанного объема. Перемешать не допуская вспенивания. Перед
использованием выдержать в течение 10 мин при температуре от 17°С до 27 °С.
В соответствии с числом используемых стрипов отобрать в ванночку
необходимое количество согласно Таблице 1.
Хранение:
— сухие РК-1, РК-2 в течение срока годности набора при температуре от 2 °С
до 8 °С;
— восстановленные из сухого состояния РК-1, РК-2 в закрытых флаконах
при температуре от 2 °С до 8 °С не более 5 суток.
Таблица 1. Таблица расхода реагентов
Количество используемых стрипов
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
На приготовление промывочного раствора
ФСБ-Т, мл 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Вода очищенная, мл до
50
до
100
до
150
до
200
до
250
до
300
до
350
до
400
до
450
до
500
до
550
до
600
Готовые к применению реагенты
СТОП, мл 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6
РК-1, мл 0,4 0,6 0,9 1,2 1,4 1,6 1,8 2,2 2,4 2,6 2,8 3,1
РК-2, мл 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0
На приготовление рабочего раствора хромогена
ТМБ, мл 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6
СР, мл 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0
7.2.6 Приготовление рабочего раствора хромогена
Во флаконе с ТМБ допускается наличие кристаллического осадка. При его
наличии прогреть раствор в термостате при температуре 37 °С до полного его
растворения.
Избегать попадания под прямые солнечные лучи.
В ванночку отобрать необходимый объем ТМБ в зависимости от количества
используемых стрипов согласно Таблице 1. Добавить к нему соответствующий
объем СР, тщательно перемешать. Очередность внесения в ванночку ТМБ и СР
не влияет на результаты анализа.
Хранение: рабочий раствор хромогена не более 4 часов после
приготовления при температуре от 4 °С до 27 °С в защищённом от света месте,
неиспользованные ТМБ и СР в закрытых флаконах в течение срока годности
13
набора при температуре от 2 °С до 8 °С.
7.3. Процедура иммуноферментного анализа
Перед постановкой реакции все реагенты набора необходимо выдержать не
менее 30 мин при температуре от 17 °С до 27 °С. Убедиться в отсутствии
кристаллического осадка во флаконах с ФСБ-Т и ТМБ.
7.3.1 Подготовить иммуносорбент ИС, как описано в 7.2.1. Приготовить
растворы конъюгатов 1 и 2, контрольные образцы, рабочий раствор хромогена
как описано в п. 7.2.4, п.7.2.5 и п.7.2.6.,
Внести в лунки ИС по 100 мкл исследуемых и контрольных образцов.
Внесение контрольных образцов:
— в одну лунку ИС внести 100 мкл К+ВИЧ,
— в одну лунку ИС внести 100 мкл К+HBsAg,
— в одну лунку ИС внести 100 мкл К+ВГС,
— в одну лунку ИС внести 100 мкл К+Сиф,
— в две лунки ИС внести по 100 мкл К-.
При одновременной постановке анализа на двух и более планшетах такая
схема постановки контролей обязательна для каждого планшета.
Во все лунки планшета внести по 30 мкл РРО.
Во избежание контаминации, при внесении РРО нельзя допускать касания
наконечниками лунок планшета и исследуемых образцов.
Время на выполнение процедуры 7.3.1 не должно превышать 30 мин.
При ручной постановке анализа все лунки иммуносорбента заклеить
пленкой.
Иммуносорбент инкубировать 60 мин при частоте шейкирования от 800 до
900 об/мин и температуре (42±1) °С.
7.3.2 По окончании инкубации (без промывки!) во все лунки ИС внести по 30
мкл восстановленного РК-1. При внесении раствора не касаться наконечниками
образцов или краев лунок планшета.
При ручной постановке анализа все лунки иммуносорбента заклеить
пленкой.
Иммуносорбент инкубировать 30 мин при частоте шейкирования от 800 до
900 об/мин и температуре (42±1) °С.
7.3.3 По окончании инкубации содержимое лунок иммуносорбента собрать в
сосуд с дезинфицирующим раствором, промыть все лунки промывочным
раствором и удалить влагу как описано в 7.1.3 и 7.1.4.
7.3.4. Во все лунки иммуносорбента внести по 100 мкл восстановленного РК2. При ручной постановке анализа все лунки иммуносорбента заклеить пленкой.
Иммуносорбент инкубировать 10 мин при частоте шейкирования от 800 до
900 об/мин и температуре (42±1) °С.
7.3.5 По окончании инкубации содержимое лунок иммуносорбента собрать в
сосуд с дезинфицирующим раствором, промыть все лунки промывочным
раствором и удалить влагу как описано в 7.1.3 и 7.1.4.
7.3.6 Во все лунки иммуносорбента внести по 100 мкл рабочего раствора
хромогена. При ручной постановке учитывать требования 7.1.2. При ручной
постановке анализа все лунки иммуносорбента заклеить пленкой.
Защищенный от света иммуносорбент инкубировать 15 минут при
14
температуре (42±1) °С.
7.3.7 Реакцию остановить добавлением во все лунки иммуносорбента 50 мкл
реагента СТОП.
Время между остановкой реакции и регистрацией результатов не должно
превышать 15 мин.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результаты ИФА регистрировать с помощью спектрофотометра, измеряя
оптическую плотность (ОП) в двухволновом режиме: основной фильтр — 450
нм, волна сравнения — в диапазоне 620-700 нм.
Допустима регистрация результатов только с основным фильтром 450 нм.
Выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк») осуществлять по
воздуху.
9.УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ
Результаты анализа учитывать только при соблюдении следующих условий.
9.1 Значения ОП в лунках с:
К+ВИЧ (ОП К+ВИЧ) более 0,500 о.е.;
К+HBsAg (ОП К+HBsAg) более 0,500 о.е.;
К+ВГС (ОП К+ВГС) более 0,500 о.е.;
К+Сиф (ОП К+Сиф) более 0,500 о.е.;
9.2 Каждое значение ОП в лунках с К- (ОП К-) менее 0,200 о.е.
9.3 Интерпретация результатов ИФА
Для интерпретации результатов рассчитать ОП(К-)ср по формуле:
ОП(К-)ср. = (ОП(К-)1+ОП(К-)2)/2, (1)
где ОП(К-)ср. – среднее значение ОП в лунках с К-;
ОП(К-) – значение оптической плотности в лунке с К-.
Затем рассчитать значение ОПкрит. по формуле:
ОПкрит. = ОП(К-)ср. + 0,200, (2)
где ОПкрит. – критическое значение оптической плотности.
Считать образец отрицательным без необходимости дальнейшего
исследования если:
ОП образца менее ОПкрит (ОПобразца < ОПкрит.);
Считать образец положительным если:
ОП образца более или равно ОПкрит (ОПобразца>ОПкрит); в этом случае данный
образец необходимо исследовать на наличие конкретных из выше
перечисленных аналитов.
Для исследуемых образцов дополнительно можно рассчитать КПобр по
формуле:
КПобр = ОПобр/ОПкрит, (3)
где КПобр — коэффициент позитивности образца.
где ОПкрит – критическое значение оптической плотности.
9.4 Ограничения метода
Ни один из известных методов тестирования не может дать полной гарантии
положительного и отрицательного результата анализа. ИФА, являясь высокочувствительным методом, имеющим в основе сложные химические реакции, может
15
давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты.
Несоблюдение процедур, описанных в пункте 7.1 настоящей инструкции,
может значительно сказаться на результатах анализа, привести как к ложноположительным, так и к ложноотрицательным результатам.
На раннем этапе инфекции антитела/антигены присутствуют в очень низких
концентрациях, соответственно, отрицательный результат может показывать,
что тестируемый образец не содержит детектируемого набором реагентов количества антител/антигенов. Образцы с КП в диапазоне от 0,8 до 1,2 могут содержать критически малое значение аналита, на нижнем пороге его обнаружения,
такие образцы подлежат наблюдению во временной динамике.
10.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор реагентов «Биопалитра мультиСКРИН» хранить и транспортировать в
соответствии с ТУ 21.20.23-009-23548172-2017 при температуре от 2 °С до 8 °С.
Допускается транспортирование при температуре до 27 °С не более 10 суток.
При продолжительности транспортирования более 10 суток изделие следует
поместить в термоконтейнер. Не допускать замораживания. Изделия,
хранившиеся и транспортированные с нарушением температурного режима,
применению не подлежат.
Срок годности: набора реагентов «Биопалитра мультиСКРИН» 24 месяца;
вскрытых компонентов изделия – в течение срока годности набора реагентов при
температуре от 2 °С до 8 °С (см. 7.2); восстановленных компонентов изделия —
не более 5 суток при температуре от 2 °С до 8 °С; рабочего раствора хромогена
– не более 4 часов после приготовления при температуре от 4 °С до 27 °С в
защищённом от света месте (см. 7.2).
Набор реагентов «Биопалитра мультиСКРИН» не подлежит техническому
обслуживанию и ремонту. К данному медицинскому изделию не применима
калибровка, однако необходимо проводить калибровку лабораторного
оборудования в соответствии с инструкцией производителя оборудования.
Побочных эффектов при использовании набора реагентов «Биопалитра
мультиСКРИН» не обнаружено. Не содержит в составе лекарственных средств.
Изделие не стерильно.
Производитель гарантирует соответствие качества набора реагентов
«Биопалитра мультиСКРИН» ТУ 21.20.23-009-23548172-2017 при соблюдении
условий транспортирования, хранения и применения, установленных настоящей
инструкцией.
«Только для диагностики ин витро».
Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических
учреждений.
Для службы крови.