HygieneChek™ PLUS
Дип-слайды для микробиологического мониторинга

1. Предполагаемое применение
Дип-слайды HygieneChek™ PLUS — это
полуколичественный аналитический инструмент
на основе культивирования, предназначенный
для мониторинга микробного загрязнения в цепи
производства пищевой продукции, а также в
других отраслях, где требуется контроль
микроорганизмов. Дип-слайды готовы к
использованию, и для выполнения протокола
тестирования не требуется особых знаний. В
отличие от количественных посевов,
тестирование с помощью Дип-слайдов может
проводиться независимо от доступа к
микробиологической лаборатории. Кроме того, их
конструкция обеспечивает безопасное хранение
извлеченных микроорганизмов, тем самым
предотвращая случайное загрязнение
помещений.
Хотя большинство типов образцов можно
протестировать с помощью Дип-слайдов
HygieneChek ™ PLUS, наиболее подходящими
являются поверхности и жидкости. Плоские
поверхности и невязкие жидкости могут быть
протестированы путем прямого посева, в то время
как для других типов образцов требуется
проведение этапов отбора проб или
пробоподготовки перед посевом на подложки. На
неплоских поверхностях требуется отбор проб с
помощью тампона; другие типы проб, такие как
вязкие жидкости, требуют предварительного
разведения.
Несмотря на то, что это полуколичественный
метод, тестирование с помощью Дип-слайдов дает
результаты, сравнимые по величине с
количественными методами, использующими
агаровые пластины. Таким образом, Дип-слайды
HygieneChek ™ PLUS можно использовать для
оценки количества микробов и наблюдения за
тенденциями загрязнения в соответствии с
внедренными руководящими принципами
мониторинга. Если не наблюдается изменений в
характере загрязнения, Дип-слайд можно
выбросить, чтобы избежать дальнейших
временных затрат и дорогостоящей обработки. В
качестве альтернативы он может быть отправлен
в компетентную микробиологическую
лабораторию для дальнейшего исследования.
2. Содержимое набора
Дип-слайды HygieneChek™ PLUS поставляются в
коробках по 10 шт. Каждая сторона пластины с
обеих сторон покрыта агаровой питательной
средой (см. таблицу 1), либо одинаковой, либо
отличной (список доступных комбинаций смотрите
в материалах, в каталоге Romer Labs), в общей
сложности для проведения 20 тестов.
3. Условия хранения
Большинство агаров можно хранить при
температуре от 2 до 25°C. Однако Дип-слайды,
содержащие AL, TBX, не следует хранить при
температуре выше 8°C. Соответствующие
температуры хранения указаны на маркировке,
помещённой на коробках. Большие колебания
температуры во время хранения могут привести к
испарению воды из агара и конденсации на
стенках контейнера, что в итоге может привести к
обезвоживанию агара. Хранение в часто
открываемом холодильнике может привести к
возникновению таких колебаний. Небольшое
количество конденсата является нормальным
явлением и не повлияет на результаты теста. Дипслайды, извлечённые из коробки, следует хранить,
чтобы на них не попадал свет.
4. Оборудование и расходные материалы
Тестирование дип-слайдами HygieneChek™ PLUS
требует наличия:
 Микробиологический инкубатор,
способный работать в диапазоне
температур, специфичном для
тестируемого параметра (см. пункт 9)
 Стерильный стакан или другой контейнер
глубиной 80 мм (для жидких образцов)
 Автоклав и автоклавные пакеты или
другие средства инактивации или
безопасного хранения биологически
опасных образцов
5. Принцип тестирования
Тестирование с помощью Дип-слайдов HygieneChek
™ PLUS проводится в три этапа: (1) инокуляция
поверхности агаров одним из нескольких методов,
в зависимости от типа образца; (2) инкубация Дпислайдов при требуемых температурах, от 1 до 10
дней, в зависимости от интересующих
микроорганизмов, содержащихся в образце; и (3)
оценка роста микроорганизмов и выражение
результатов. Четвертый этап обычно требуется при
наличии патогенных Salmonella spp., Listeria spp. и
Staphylococcus spp. есть подозрение, что
предполагает отправку Дип-слайдов, содержащих
предполагаемые колонии, в компетентную
микробиологическую лабораторию для
подтверждения.
Версия: v04
Дата: 12.2023
www.romerlabs.com 3 Инструкция _HC-PLUS_MIBI_RUS_v04
Таблица 1. Агаровая среда, используемая в Дип-слайдах HygieneChek™ PLUS
Параметр Название Агара Формула1 Цвет2 Режим инкубации3,4
ОМЧ Tryptone Soy Agar (TSA) + TTC5
ISO 22964 кремовый/янтарн
ый
30-37 °C 24-72 ч
6
Дрожжи & Плесень Malt Extract Agar (MEA) EN 1650 янтарный 25-30 °C 3-7 д
6
Энетеробактерии Violet Red Bile Glucose Agar (VRBG) ISO 21528 красный/фиолето
вый
30-37 °C 18-24 ч
Колиформы Violet Red Bile Lactose Agar (VRBL) ISO 4832 красный/фиолето
вый
30-37 °C 18-24 ч
E.coli Triptone-Bile-X-Glucuronate Agar(TBX) ISO 16649 кремовый/белый 37-44 °C 20-24 ч
Контроль дезинфекции Dey-Engley Neutralizing Agar (DEA) USP8 пурпурный/фиоле
товый
30-37 °C 24-48 ч
Молочнокислые бактерии Agar acc. de Mann, Rogosa & Sharpe (MRS) ISO 15214 янтарный
/коричневый
30±1 °C 48-72 ч
Сальмонелла Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD) ISO 6579 красный 36±2 °C 21-27 ч
Листерия Agar Listeria acc. Ottaviani & Agosti (AL) ISO 11290 кремовый 37±1 °C 24-48 ч
Стафилокок Mannitol Salt Agar (MSA) EP9
; USP красный 36±2 °C 24-48 ч
1Как определено в указанных справочных документах;
2Типично для свежих агаров, оно может меняться во время инкубации в результате роста микроорганизмов;
3Пользователи
должны корректировать условия инкубации в соответствии с областью применения и требованиями к конкретному процессу (может потребоваться валидация); 4Для подсчета
на верхнем пределе, когда более длительная инкубация приведет к растеканию/перекрытию колонии, рекомендуется считывание после более короткого времени инкубации;
5TTC
– 2,3,5-трифенилтетразолий хлорид;
6Инкубацию для определения общего количества дрожжей и плесневых грибов также можно проводить при температуре 7±1 °C в течение 10
дней, когда требуются психотрофные микроорганизмы;
7PЗапатентованная формула (нераскрытый состав), разработанная Solabia SAS; 8USP – Фармакопея Соединенных
Штатов;; 9EP – Европейская фармакопея
Поверхность агара, нанесённого с обеих сторон
подложки, инокулируют одним из следующих
способов: (1) непосредственным контактом с
поверхностью; (2) погружением в жидкость; (3)
взятием мазка. Инкубацию проводят в аэробных
условиях, при температуре и в течение времени,
которые позволят микроорганизму расти. Оценку
роста микроорганизмов проводят путём изучения
и возможно, подсчёта колоний, появившихся на
поверхности агара. Сравнительную схему,
приведённую в приложении 3 можно
использовать для быстрой оценки результатов.
Рис 1. Компоненты Дип-слайдов HygieneChek™ PLUS (1
– цилиндрический контейнер; 2 – закручивающаяся
крышка; 3 – агар)
6. Общие комментарии
Дизайн Дип-слайдов HygieneChek™ PLUS включает
3 компонента: (1) прозрачный цилиндрический
контейнер; (2) единый элемент, состоящий из
завинчивающейся крышки и подложки; и (3) два
слоя агара, которые покрывают каждую сторону
подложки площадью 10 см2 с одной стороны (рис.
1). Оба части, цилиндрический контейнер и
элемент с завинчивающейся крышкой,
изготовлены из полипропилена (PP), пластика,
который не рассыпается на куски или осколки.
При работе с подложкой не следует прикасаться к
поверхности агара. Чтобы открыть контейнер и
извлечь подложку из него, поверните
завинчивающуюся крышку против часовой
стрелки. Чтобы закрыть и опечатать контейнер,
поверните его по часовой стрелке. Чтобы
проветрить помещение, откройте крышку на 13 мм.
Контейнер следует приоткрыть во время
инкубации и герметично закрывать для всех
других целей, особенно для транспортировки.
Задержка между отбором проб/инокуляцией и
инкубацией должна составлять не более 48 часов.
Мы рекомендуем инкубировать подложки как
можно быстрее после инокуляции и не позднее,
чем через 24 часа. Если инкубация невозможна в
течение 45 минут с момента отбора
проб/инокуляции, подложки всегда следует
хранить при температуре от 1 до 8 °C, закрыв
контейнер.
Версия: v04
Дата: 12.2023
www.romerlabs.com 4 Инструкция _HC-PLUS_MIBI_RUS_v04
7. Тестирование поверхностей
Микроорганизмы можно обнаружить на визуально
чистых поверхностях, но чаще всего они встречаются
во влажных и загрязненных местах, где они могут
сохраняться или даже размножаться. Трудно
очищаемое оборудование или труднодоступные
места, такие как отверстия, зазоры и кромки,
являются потенциальными резервуарами
микроорганизмов, из которых предпочтительно
следует отбирать пробы. Оборудование с другими
недоступными поверхностями, на которых могут
скапливаться продукты питания, возможно,
потребуется демонтировать. Отбор проб может
осуществляться как во время производства, так и
после него, а также после очистки и дезинфекции.
Для получения общих указаний по испытанию
поверхностей, пожалуйста, обратитесь к стандарту
ISO 18593. Образцы с плоских поверхностей
отбираются методом контакта с агаром (см.
приложение 1), при котором поверхность агара в
форме мениска осторожно прижимается к
тестируемой поверхности, избегая скольжения,
таким образом извлекая и инокулируя часть его
микробной нагрузки. Отбор проб поверхностей, как
известно, происходит неравномерно. При отборе
проб с помощью предметных стёкол HygieneChek ™
PLUS согласованность времени (около 10 с) и
давления позволит повысить точность и
воспроизводимость результатов. Слишком сильное
давление приведёт к несовершенному контакту
агара с тестируемой поверхностью. После отбора
проб поверхность следует протереть 70% этанолом,
чтобы на отобранной поверхности не остались следы
питательных веществ, влаги или других веществ.
Неплоские поверхности и труднодоступные места
можно протестировать, взяв образец стерильным
тампоном-палочкой, а затем проведя мазком по
поверхности агара (см. приложение 1). Выделение
микроорганизмов выше при использовании
увлажненных тампонов. Если тестируемая область
влажная, рекомендуется использовать сухой тампон;
если она сухая, то требуется увлажнённый тампон.
Для контроля за гигиеной персонала тестирование
может проводиться либо методом контакта с агаром,
либо методом взятия тампона, в зависимости от
характеристик тестируемой поверхности. Агар можно
прижимать к ладоням, кончикам пальцев и одежде
(см. приложение 1). Смоченный тампон можно
использовать для взятия проб между пальцами, на
подошвах ботинок и в других местах, где могут
находиться бактерии.
8. Тестирование жидкостей
Жидкости могут быть испытаны с использованием
метода погружения (см. приложение 1). После
отбора проб и тщательного перемешивания
подвыборку следует перелить в стерильный
стакан. Контейнер для погружных пробирок также
можно использовать вместо стерильного стакана.
Предметное стекло необходимо удерживать за
ручку с завинчивающейся крышкой, пока агар
полностью погружен в тестируемую жидкость.
Объем тестируемой жидкости должен быть
достаточно большим, чтобы обеспечить полное
погружение. Излишки жидкости и любые
оставшиеся капли следует слить, прикоснувшись
кончиком предметного стекла – не к агару – к
внутренней стенке или краю стакана или к
впитывающей бумаге.
Вязкие или сильно загрязненные жидкости перед
инокуляцией требуют разбавления стерильным
разбавителем. Обычно используется соотношение
9 частей разбавителя к 1 части образца
(десятичное разбавление). Рекомендуется
использовать пептоновый физиологический
раствор, забуференную пептоновую воду или
другие разбавители общего назначения. При
разбавлении пробы следует учитывать
предполагаемый предел обнаружения методом
погружения (100 КОЕ/мл). В качестве
альтернативы, инокуляцию можно провести с
помощью мазка.

Рекомендации
EN 1650:2019. Химические дезинфицирующие средства и антисептики —
Количественный суспензионный тест для оценки фунгицидной или
дрожжеобразующей активности химических дезинфицирующих средств
и антисептиков
ISO 4832:2006. Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных — Горизонтальный метод подсчёта кишечных палочек — Метод
подсчёта колоний
ISO 6579-1:2017. Микробиология пищевой цепи — Горизонтальный метод
обнаружения, подсчёта и серотипирования сальмонелл — Часть 1:
Методика обнаружения
ISO 11133:2014. Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных
и воды — Приготовление, производство, хранение и тестирование
питательных сред на эффективность
ISO 11290-2:2017. Микробиология пищевой цепи — Горизонтальный метод
обнаружения и подсчёта Listeria monocytogenes и Listeria spp. — Часть 2:
Метод подсчёта
ISO 15214:1998. Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных — Горизонтальный метод подсчёта мезофильных
молочнокислых бактерий — Метод подсчёта колоний при 30°C
ISO 16649-1:2018 Микробиология пищевой цепи — Горизонтальные
методы отбора проб с поверхности beta-glucuronidase-positive
Escherichia coli — Часть1: Техника подсчёта колоний при 44°С используя
мембраны и 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D — glucuronide
ISO 18593:2018. Микробиология пищевой цепи — Горизонтальные методы
отбора проб с поверхности
ISO 21528-2:2017. Микробиология пищевой цепи — Горизонтальный метод
обнаружения и подсчёта энтеробактерий — Часть 2: Метод подсчёта
колоний
ISO 22964:2017. Микробиология пищевой цепи — горизонтальный метод
обнаружения Cronobacter spp.
Версия: v04
Дата: 12.2023
www.romerlabs.com 6 Инструкция _HC-PLUS_MIBI_RUS_v04
Приложение 1
Техника взятия образца
Контактный метод (плоские поверхности) Контакт с Агаром (Персональный контроль гигиены)
Погружение Перенос предварительно посеянным тампоном
Версия: v04
Дата: 12.2023
www.romerlabs.com 7 Инструкция _HC-PLUS_MIBI_RUS_v04
Приложение 2
Руководство по исследованию колоний, разработанное для Дип-слайдов Hygienechek ™ PLUS
Параметр Агар Коментарии
ОМЧ TSA + TTC  Агар прозрачный, кремового или янтарного цвета; при неправильном хранении
(длительном воздействии света) он может пожелтеть.
 Неселективная формула общего назначения поддерживает рост большинства аэробных
или анаэробных видов, встречающихся в пищевой цепи.
 Количество в основном состоит из бактерий, хотя время инкубации около 72 часов также
позволяет размножаться некоторым дрожжам и плесневым грибам.
 Большинство колоний выглядят красными из-за уменьшения и накопления TTC.
 ТТК обладает незначительным ингибирующим действием, которое ограничивает
чрезмерный рост колоний; некоторым видам Staphylococcus species для роста, может
потребоваться до 72 часов
 Участки агара могут покраснеть после воздействия восстановителей (дезинфицирующих
средств, таких как альдегиды) или инкубации в плотно закрытой пробирке
Дрожжи & плесень MEA  Агар прозрачный и янтарного цвета.
 Дрожжи образуют колонии от белого до светло-коричневого цвета менее чем за 72 часа.
 Плесневые грибки образуют нечеткие или зернистые колонии с белыми краями и
интенсивно окрашенными центрами (если происходит споруляция) через 5-7 дней.
 Некоторым видам плесени может потребоваться до 2 недель, чтобы образовались
видимые колонии.
 Некоторые (некачественные) формы имеют тенденцию быстро распространяться по
поверхности агара и могут занимать весь контейнер.
 Бактерии, устойчивые к низким значениям рН, могут образовывать колонии, которые
можно ошибочно принять за дрожжи; в критических случаях рекомендуется провести
микроскопическое исследование
Энтеробактерии VRBG  Агар прозрачный, от красного до фиолетового цвета.
 Характерные колонии от розовых до красных или фиолетовых (с ореолами осаждения
или без них); некоторые энтеробактерии могут вызывать изменение цвета своих
колоний или среды, а некоторые могут образовывать разрастающиеся колонии.
 Окончательные результаты требуют подтверждения наличия колоний (не критично для
целей мониторинга).
Колиформы VRBL  Агар прозрачный, от красного до фиолетового цвета.
 Характерные колонии пурпурно-красного цвета диаметром не менее 0,5 мм и иногда
окружены красноватой зоной; такие колонии не требуют дальнейшего подтверждения.
 Пурпурно-красные колонии меньшего размера требуют подтверждения для получения
окончательных результатов (не критично для целей мониторинга).
E.coli TBX  Агар кремового/белого цвета и слегка опалесцирует.
 Состав среды позволяет проводить одновременное и специфическое определение без
подтверждения наличия β-glucuronidase-positive Escherichia coli и других колиформных
бактерий в пищевой цепи.
 Колонии β- глюкуронидаза -положительные E. coli имеют цвет от синего до синезелёного.
 Некоторые штаммы E. coli, в том числе патогенные (в частности, относящиеся к серотипу
O157:H7), не будут обнаружены этим методом.
 Активность β-глюкуронидазы также может проявляться при температуре 44°С
некоторыми другими представителями Enterobacteriaceae особенно Shigella spp. и
Salmonella spp.
Контроль
дезинфекции
DEA  Агар имеет пурпурно-фиолетовый цвет и может иметь мелкий осадок.
 Тиогликолят натрия, тиосульфат натрия, бисульфит натрия, соевый лецитин и
полисорбат 80 в среде нейтрализуют следы дезинфицирующих средств, включая
соединения четвертичного аммония, фенольные соединения, препараты йода и хлора,
ртуть, формальдегид и глутаровый альдегид.
 Неселективная формула поддерживает рост большинства аэробных или
аэротолерантных видов, встречающихся в пищевой цепи, хотя короткое время
инкубации позволит расти немногим микроорганизмам, кроме бактерий.
 Большинство колоний будет окружено зоной желтого обесцвечивания; грибы, как
правило, нет.
Молочнокислые
бактерии
MRS  Агар прозрачный, от янтарного до светло-коричневого цвета.
 Характерные колонии белого цвета и шириной не менее 0,5 мм.
 Некоторые виды Leuconostoc могут образовывать большие слизистые колонии, которые
могут препятствовать развитию других колоний.
 Окончательные результаты требуют подтверждения наличия колоний (не критично для
целей мониторинга)

Параметр Агар Коментарии
Сальмонелла XLD  Агар прозрачный и красный.
 Типичные колонии Сальмонелл имеют черную середину и слегка прозрачные края
красноватого цвета.
 Атипичные колонии Сальмонелл розовые с более темным розовым центром или желтые с
почернением или без него.
 Следует предполагать, что все новообразования являются Сальмонеллами; окончательные
результаты требуют подтверждения наличия колоний.
Листерия AL  Агар кремового цвета и слегка опалесцирует.
 Сине-зеленые колонии, окруженные непрозрачным ореолом, типичны для Listeria
monocytogenes и Listeria ivanovii.
 Сине-зеленые колонии без ореола характерны для других видов листерий; у некоторых
штаммов L. monocytogenes образование ореола может происходить медленно.
 Некоторые штаммы L. monocytogenes могут расти очень быстро, что приводит к образованию
соседних / перекрывающихся колоний; исследование агара всего через 24 часа инкубации
поможет подсчету.
 Следует предполагать, что все сине-зеленые колонии принадлежат L. monocytogenes;
окончательные
Стафилокок MSA  Агар прозрачный и красный.
 Патогенные Стафилококки образуют ярко-желтые колонии, окруженные желтым кольцом или
участком.
 Непатогенные стафилококки обычно образуют небольшие красные колонии, которые не
меняют цвет среды.
 Через 48 часов могут вырасти другие виды.
 Окончательные результаты требуют подтверждения наличия колоний (не критично для целей
мониторинга).